Propiedades de amilasas provenientes de la broca del café Hypothenemus hampei (Coleoptera: Scolytidae)

Resumen

La amilasa es una enzima de gran actividad en el tracto digestivo de los insectos, su función le permite al insecto digerir activamente el almidón presente en el alimento, suministrándole la glucosa requerida para cumplir con sus funciones metabólicas. El conocimiento de la actividad amilolítica de la broca constituye una herramienta útil en la selección de inhibidores para estas enzimas que pueden ser utilizados en la producción de café transgénico. Con el objetivo de establecer el mejor medio de extracción, el pH y la temperatura óptima para la actividad amilolítica del insecto, se homogeneizó 1 g de adultos con 5 mi de diferentes medios de extracción H 0, NaCl1 % y soluciones buffer a diferentes pH (3,02 - 8,0). La determinación del pH óptimo de la enzima se estimó utilizando buffers de pH 3,0 - 9,0. La temperatura óptima de actividad de la enzima se llevó a cabo a diferentes temperaturas (25 - 70ºC) con 5 repeticiones para todos los tratamientos. En todos los casos, la actividad enzimática se determinó espectrofotométricamente a 580 nm. El zimograma de actividad se realizó por medio de electroforesis nativa en geles homogéneos del 15%. Los resultados encontrados permiten evidenciar que el mejor medio de extracción para la amilasa es NaCl al 1 %, el pH óptimo de actividad es de 5,0 y la temperatura óptima de actividad es de 40ºC. En el zimograma se pudo encontrar que tt. hampei presenta varias bandas de actividad, dos de las cuales son enzimas mayoritarias.